生化試劑盒在使用過程中易受到多種污染，包括微生物（如細(xì)菌、真菌、支原體）、RNase/DNase、交叉試劑殘留等，這些污染會嚴(yán)重影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與可重復(fù)性。預(yù)防措施需覆蓋實驗前準(zhǔn)備、操作過程及實驗后處理全過程。
預(yù)防措施
1、操作環(huán)境清潔
定期使用支原體祛除噴霧劑或濕巾對工作臺面、液氮罐、水浴鍋等進(jìn)行消殺。
水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽中可加入0.5% WaterShield?類試劑防止水源污染，有效期約一個月。
實驗室建議每半個月全面清潔一次，頻率可根據(jù)使用強(qiáng)度調(diào)整。
2、使用無污染耗材
使用無RNase/DNase的塑料制品和槍頭，避免RNA/DNA提取過程中的降解。
玻璃器皿可在150°C烘烤4小時去除RNase；塑料器皿可用0.5M NaOH浸泡10分鐘后清洗滅菌。
配制溶液應(yīng)使用RNase-free水（如經(jīng)DEPC處理后高壓滅菌）。
3、規(guī)范操作流程
進(jìn)入細(xì)胞間前佩戴專用防護(hù)服、口罩、鞋套，操作前更換新手套，防止皮膚帶入RNase。
使用一次性吸頭，避免不同試劑間交叉污染，尤其在加樣時注意不混用槍頭。
試劑添加順序一致，溫育時間統(tǒng)一，確保反應(yīng)條件標(biāo)準(zhǔn)化。
4、試劑與樣品管理
試劑按說明書儲存（通常2–8°C），使用前恢復(fù)至室溫。
凍存樣品避免反復(fù)凍融，解凍后盡快使用。
不用的板條應(yīng)及時密封放回4°C保存，防止受潮或污染。
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預(yù)防維度 |
具體措施 |
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環(huán)境清潔 |
使用Mycoplasma-off?噴霧劑定期消殺臺面、液氮罐；水槽加WaterShield?預(yù)防污染。 |
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耗材處理 |
玻璃器皿150°C烘烤4h；塑料器皿用NaOH浸泡；使用RNase-free水配液。 |
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操作規(guī)范 |
更換新手套；使用一次性吸頭；不交叉使用加樣器。 |
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試劑與樣品管理 |
試劑2–8°C保存；避免反復(fù)凍融；未用板條密封冷藏。 |
以上措施主要針對細(xì)胞培養(yǎng)、RNA提取及ELISA類試劑盒。若涉及全自動生化分析儀項目間的試劑交叉污染，則還需優(yōu)化檢測順序、加強(qiáng)儀器沖洗、分隔易干擾項目等。
建議
為最大限度降低污染風(fēng)險，建議實驗室建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP），定期培訓(xùn)人員，同時配備專用清潔試劑（如支原體清除劑、RNase清除劑）。對于高價值實驗，可使用抗污染試劑盒或添加蛋白酶抑制劑（如PMSF）以保護(hù)目標(biāo)分子。
