在ELISA實驗過程，我們實驗過程經常會出現一些誤差，例如操作誤差、樣本試劑誤差、儀器誤差等。為了實驗更順利進行，我們需要了解酶聯免疫吸附實驗常見的誤差。今天，上海撫生公司為大家詳細介紹下在ELISA實驗中常見的誤差：
一、人員專業素養?
檢驗技師需具備扎實的操作經驗和問題分析能力，能及時處理實驗中的意外情況。新手建議通過預實驗熟悉流程，如對樣本進行梯度稀釋，確保檢測值落在標準曲線范圍內。
二、?儀器精準校準?
移液槍是最大誤差來源，需定期校準（每年至少一次），日常可用分析天自查，誤差超過2%應立即停用。選擇量程時，移液體積應在量程的35%-100%之間。
三、?規范操作流程?
嚴格按說明書操作，不同批號試劑不可混用。
加樣需準確、快速，避免試劑長時間暴露導致失效。
顯色劑現配現用，倒回未用完的試劑可能引發反應，30分鐘內可復用，但用后需丟棄。
四、?徹底洗滌步驟?
洗滌不徹底會導致假陽性，需使用新鮮配制的洗滌液，每孔加滿洗液后靜置30秒，徹底吸棄并輕拍板子去除殘留。洗板機需定期清洗，避免污染。
五、?嚴控反應時間?
孵育時間過長或過短均影響結果，需使用恒溫箱保持18-28℃，并分別定時每塊板。顯色時間需嚴格掌握，過短易假陰性，過長易假陽性。
六、?試劑與樣本管理?
試劑啟用前需進行陰、陽對照試驗，確保穩定性。
血清樣本需完全凝固后檢測，避免纖維蛋白殘留導致假陽性。細胞上清需過濾分裝，避免反復凍融。
七、?數據記錄與分析?
實驗記錄需清晰，避免加錯樣本。
數據導出時需檢查OD值異常，確保陰陽性對照在合理范圍內。標準曲線R2低時，需優化抗體稀釋度或封閉條件。
八、?環境與細節控制?
避免在冷氣、光照或通風口附近操作，防止溫度波動。
試劑回溫需緩慢（如從-20℃移至4℃再至室溫），避免蛋白質變性。
通過以上措施，可顯著提升ELISA實驗的重復性和準確性。
