ELISA試劑盒的最低檢測限（Limit of Detection，LOD）是指能夠可靠地檢測到的被測物的最低濃度或量。它是一個重要的性能指標，用于衡量試劑盒的靈敏度。
確定ELISA試劑盒的最低檢測限是一個系統性的過程，以下是確定ELISA試劑盒最低檢測限的關鍵步驟和考慮因素：
1. 標準品的制備與稀釋
使用已知濃度的標準品進行一系列稀釋，制備不同濃度的標準品溶液。這些標準品溶液將用于構建標準曲線。
能夠被檢測到的最低濃度的標準品即為初步的最低檢測限[。
2. 標準曲線的構建
將不同濃度的標準品溶液加入到ELISA試劑盒中，按照說明書進行操作，最后讀取吸光度值（OD值）。
利用這些數據構建標準曲線，橫坐標為標準品濃度，縱坐標為OD值。通過回歸分析得到標準曲線的方程。
3、靈敏度與檢測范圍
高靈敏度試劑盒（如Thermo Fisher化學發光法）可達fg/mL級，而常規比色法為pg/mL級?。
線性范圍需覆蓋LOD至最高標準品濃度（如0.12-80 pg/mL）。
4、?精密度要求
板內變異系數（CV）應<10%，板間CV<15%
批間一致性需通過質控品驗證（如NIBSC標準品校準）?。
5、?干擾實驗
需驗證樣本基質（如血清、腦脊液）對檢測的影響，回收率應達80%-110%。
6、數據處理
通過繪制標準品濃度與吸光度值的關系圖，建立標準曲線。一般采用四參數非線性回歸模型來擬合數據點，確保曲線的準確性和線性范圍。
7、計算LoD
LoD通常定義為能夠以95%的置信水平檢測到的最低濃度，即在空白對照孔的吸光度值加上3倍空白對照的標準偏差的吸光度值所對應的濃度。
8、考慮空白值和陰性對照
在計算最低檢測限時，需要考慮空白值（即只加了稀釋液的對照）和陰性對照的影響。如果空白值非常低，可以忽略不計；但如果空白值較高，則需要將其納入計算中，以消除背景干擾。
★操作注意事項
1、樣本稀釋需避免鉤狀效應（高濃度樣本需梯度稀釋驗證）?。
2、試劑平衡至室溫后再使用，防止水化層影響檢測精度。?
通過以上步驟，可以科學地確定ELISA試劑盒的最低檢測限，確保實驗結果的準確性和可靠性。?
