實驗原理：
將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。
細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
實驗儀器：
培養箱（調整至37℃）、培養瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血球計數板、離心機、水浴箱（37℃）。
實驗試劑：
1640培養基或DMEM培養基、胎牛血清、0.25%胰酶、Hank′s液、碘酒、75%酒精
實驗步驟：
一、原代細胞培養步驟
1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。
3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30-60分鐘。
4、剪切：用眼科剪把組織切成2-3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30-50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。
5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。
7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調整。
8、培養：置于37℃溫箱培養，如用CO2溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。
二、原代組織塊培養法
1、剪切：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸靜Hanks液，用眼科剪反復剪切1mm塊為止。
2、擺布：用彎頭吸管吸取若干小塊，置于培養瓶中，用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養瓶底部，小塊相互距離以0.5cm為宜，每一25ml培養瓶底可擺布20-30塊。
3、輕輕翻轉培養瓶，另瓶底向上，注意翻瓶時勿另組織小塊流動，塞好瓶塞，置37℃溫箱培養2小時左右（勿超過4小時），使小塊微干涸。
4、培養：從微箱中取出培養瓶，開塞，46度斜持培養瓶，箱瓶底腳部輕輕注入培養液少許，然后緩緩再把培養瓶翻轉過來，讓培養液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養。待細胞從組織塊游出數量增多后。再補加培養液。
三、貼壁細胞傳代的操作步驟：
1、吸除培養瓶內舊培養液。
2、向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。
3、置溫箱中2-5分鐘，當發現細胞質回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。
4、吸除消化液，向瓶內注入Hanks液數毫升，輕輕轉動培養瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已松動的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液單獨消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養液。
5、用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。
6、計數板計數后，把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中，置溫箱中培養。
四、懸浮型細胞傳代
1、吸出細胞培養液，放入離心管中，離心1000rpm5分鐘。
2、吸掉上清液，加入適量之新鮮培養基，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養瓶中，以正常培養條件培養。
注意事項:
1、操作前要洗手，進入超凈臺后手要用75%酒精或0.2%新潔爾滅擦試。試劑等瓶口也要擦試。
2、點燃酒精燈，操作在火焰附近進行，耐熱物品要經常在火焰上燒灼，金屬器械燒灼時間不能太長，以免退火，并冷卻后才能夾取組織，吸取過營養液的用具不能再燒灼，以免燒焦形成碳膜。
3、操作動作要準確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機會。
4、不能用手觸已消毒器皿的工作部分，工作臺面上用品要布局合理。
5、瓶子開口后要盡量保持45℃斜位。
6、 吸溶液的吸管等不能混用。
通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關的試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。
細胞培養的傳代及日常維持過程中，在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活體開始原代培養，它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。
在復性過程中引物與DNA模板鏈的結合是由堿基互補配對原理完成的。CR需要模板和酶，每一次循環都需要。酶的數量是固定的，但模板在每一次的延伸就一次用完就沒了。PCR反應參數包括變性溫度和時間、復性溫度和時間、延伸溫度和時間、循環數四方面，在PCR反應過程中都發揮著至關重要作用。
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