優化ELISA防污染實驗的靈敏度，關鍵在于規范樣本處理、選擇高特異性方法、優化洗板步驟并減少非特異性結合。
?樣本處理是基礎?。血清樣本需避免溶血（血紅蛋白會催化底物顯色）和細菌污染（可能引入內源性酶），采血后應室溫靜置2小時或4℃過夜，3000g離心20分鐘取上清，分裝后-80℃保存。細胞上清和組織樣本需裂解后離心取上清，同樣避免反復凍融。
?選擇夾心法類型?能顯著提升靈敏度。夾心法使用兩種抗體“夾住”抗原，特異性高，尤其適合檢測大分子抗原（如細胞因子、腫瘤標志物），其靈敏度通常比間接法高2-5倍。若檢測小分子物質（如藥物、激素），則競爭法更合適。
?優化洗板步驟?至關重要。洗滌不徹底是背景高的主要原因。手工洗板時，每孔注液量要足（通常300μl），浸泡時間要夠（建議30秒），拍干力度要適中，避免殘留或損傷板條。使用洗板機時，要定期檢查針頭是否堵塞，確保注液和吸液都徹底。洗板次數通常3-5次，太多太少都不行。
?避免非特異性結合?需多管齊下。封閉液（如1% BSA）能有效封閉未結合位點，降低背景。選擇高特異性抗體對（如捕獲抗體與檢測抗體識別不同表位）并驗證其親和力（KD值<10?? M）是關鍵。此外，確保實驗環境清潔，使用一次性耗材，并嚴格控制孵育時間和溫度，也能有效減少干擾。
