抗體(antibody,Ab)是機體在體內存在的外來分子、微生物等抗原物質刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產生的、可與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。抗體特異性鑒定是免疫化學技術中,確保抗原-抗體反應專一性的基礎。從根本上驗證特異性,投稿國際期刊,常常需要準備這方面數據。
蛋白質通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質的溶解度,使蛋白質凝聚而從溶液中析出。蛋白質的沉淀(protein precipitation),沉淀是溶液中的溶質由液相變成固相析出的過程。蛋白質從溶液中析出的現象,稱為蛋白質的沉淀。蛋白質沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。
細胞轉染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
ELISA實驗通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質。因此,不嚴格的洗滌容易出現交叉污染或洗不干凈背景高。 優化ELISA的重點之一在于洗滌,洗滌步驟可降低未結合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留,在最后一步產生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景,從而帶來不理想的結果。在做ELISA實驗時,洗板有兩種方法:手工法洗板 和 洗板機洗板。二者沒有本質的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結果。
ELISA酶聯免疫吸附試驗是目前臨床上最常用的免疫學檢驗方法,由于其試劑穩定,易保存,操作簡便,結果判斷較客觀,既適宜于大規模篩查試驗,又可用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子檢測等領域。ELISA有敏感性高,特異性強,重復性好的特點,但其同時存在影響因素多的不足,現就實驗操作中常見的影響因素進行分析實驗,以提高的實驗質量。